背景:
博來(lái)霉素(Zeocin)是一種從Streptomyces verticillus分離得到糖肽類銅離子螯合抗生素,博來(lái)霉素呈現(xiàn)淺藍(lán)色。當(dāng)與銅離子螯合時(shí),博來(lái)霉素沒有毒性作用。當(dāng)其進(jìn)入細(xì)胞內(nèi),銅離子會(huì)被還原并移除,此時(shí)博來(lái)霉素會(huì)發(fā)揮其毒性,通過插入DNA中,使DNA裂開,導(dǎo)致細(xì)胞死亡。基因Sh ble編碼一種大小約14kDa的蛋白質(zhì),可使表達(dá)該基因的細(xì)胞獲得對(duì)Zeocin的抗性。該蛋白可與Zeocin抗生素結(jié)合,阻止其與DNA結(jié)合,從而使細(xì)胞獲得對(duì)Zeocin的抗性。
在Escherichia coli中,博來(lái)霉素的選擇濃度范圍推薦為25-50 μg/ml,含博來(lái)霉素的LB平板(yeast extract 5 g/l, Tryptone 10 g/l, NaCl 5 g/l, Agar 15 g/l, pH 7.5)可在4℃保存1個(gè)月。在哺乳動(dòng)物細(xì)胞中,博來(lái)霉素的選擇濃度范圍為50-1000 μg/ml,常規(guī)為250-400μg/ml,應(yīng)針對(duì)每種細(xì)胞系進(jìn)行優(yōu)化。
用途:
用于細(xì)菌、真菌轉(zhuǎn)化和哺乳動(dòng)物轉(zhuǎn)染系統(tǒng)中耐藥細(xì)胞的選擇。
包裝規(guī)格:
貨號(hào) |
規(guī)格 |
濃度 |
性狀 |
RA-AD05 |
0.5ml |
100mg/ml |
無(wú)菌水溶液 |
保藏條件/穩(wěn)定性:
冷凍運(yùn)輸。-20℃避光保存。儲(chǔ)存合理的情況下,可穩(wěn)定保存6個(gè)月。
注意事項(xiàng):
1. 當(dāng)操作博來(lái)霉素溶液時(shí)請(qǐng)戴手套、穿著實(shí)驗(yàn)服、佩戴防護(hù)眼鏡;
2. 博來(lái)霉素對(duì)光敏感。請(qǐng)避光保存含博來(lái)霉素的抗性平板、培養(yǎng)基;
3. 使用博來(lái)霉素作為E.coli的篩選抗生素時(shí),請(qǐng)使用低鹽(NaCl 5 g/L)的LB培養(yǎng)基,pH請(qǐng)調(diào)節(jié)至7.5,過酸或者過堿的培養(yǎng)基都會(huì)抑制博來(lái)霉素的活性;
4. 請(qǐng)將博來(lái)霉素保存在-20℃,使用時(shí)在冰上融化。