背景:
促甲狀腺激素受體(Thyroid-stimulating hormone receptor, TSHR)主要存在甲狀腺濾泡細(xì)胞膜上,在人體生理及病理情況下都發(fā)揮著重要作用。TSHR為促甲狀腺激素(Thyroid-stimulating hormone, TSH)的特異性受體,是一種G蛋白偶聯(lián)受體,TSH通過(guò)與細(xì)胞表面的TSHR結(jié)合,觸發(fā)細(xì)胞內(nèi)cAMP的產(chǎn)生,作為第二信使的cAMP通過(guò)識(shí)別其位于基因啟動(dòng)子區(qū)的特異性反應(yīng)元件CRE(cAMP response elements)對(duì)下游基因進(jìn)行調(diào)控。TSHR表達(dá)細(xì)胞株是TSH及TSHR相關(guān)研究的有效手段,該方法需對(duì)細(xì)胞中產(chǎn)生的cAMP進(jìn)行定量,需要昂貴的試劑盒和繁瑣的ELISA檢測(cè)步驟[1]。
圖1. TSHR信號(hào)通路[2]
Rhinogen? TSHR Reporter Bioassay是一種生物發(fā)光報(bào)告基因檢測(cè)方法,其作用機(jī)理(圖2)基于TSHR反應(yīng)的主要信號(hào)通路cAMP/PKA信號(hào)途徑。本系統(tǒng)采用工程改造的中國(guó)倉(cāng)鼠卵巢細(xì)胞(Chinese hamster ovary cells,CHO cells)作為測(cè)活細(xì)胞,該細(xì)胞株穩(wěn)定表達(dá)TSHR以及由CRE反應(yīng)元件驅(qū)動(dòng)表達(dá)的螢火蟲(chóng)熒光素酶。在該細(xì)胞中,TSHR的激活觸發(fā)cAMP的產(chǎn)生,cAMP則激活熒光素酶基因的表達(dá),而熒光素酶的活性通過(guò)生物發(fā)光進(jìn)行定量。
圖2.Rhinogen? TSHR Reporter Bioassay原理圖
產(chǎn)品規(guī)格:
目錄號(hào) | 成分 | 規(guī)格 |
RA-CK08 |
TSHR報(bào)告基因測(cè)活細(xì)胞(5×106cells/ml) |
1×1ml |
Rhinogen? TSHR報(bào)告基因檢測(cè)系統(tǒng)提供的TSHR相關(guān)生物學(xué)活性檢測(cè)方法操作具有操作簡(jiǎn)便(圖3)、變異性低、量效關(guān)系良好、靈敏度高等特點(diǎn)。
1. 原理明確:基于TSHR反應(yīng)的主要信號(hào)通路cAMP/PKA信號(hào)途徑;
2. 應(yīng)用廣泛:可用于TSH的微量測(cè)定、TSHR拮抗劑的高通量篩選、TSH和TSHR作用機(jī)理研究;
3. 通 量 高:可在96孔、384孔培養(yǎng)板中進(jìn)行測(cè)定;
4. 快速易用:檢測(cè)過(guò)程簡(jiǎn)單,檢測(cè)試劑易用;
5. 信噪比高:信號(hào)/背景的比率高。
Rhinogen? TSHR報(bào)告基因檢測(cè)系統(tǒng)的各項(xiàng)特性使得其可作為針對(duì)TSH和TSHR相關(guān)研究、TSHR藥物篩選及檢測(cè)的有效手段。同時(shí),該法可作為針對(duì)TSHR藥物的生物學(xué)活性常規(guī)檢測(cè)方法及批簽發(fā)檢測(cè)指標(biāo)。
圖3. Rhinogen?TSHR Reporter Bioassay檢測(cè)流程圖
運(yùn)輸及存儲(chǔ):
運(yùn)輸方式:干冰運(yùn)輸
儲(chǔ) 存:收到細(xì)胞后,請(qǐng)立即將TSHR報(bào)告基因測(cè)活細(xì)胞凍存管轉(zhuǎn)移至-140°C以下的保存條件長(zhǎng)期保存。
參考文獻(xiàn):
[1] 王少艷, 馮憑, 方佩華. 人促甲狀腺激素受體的表達(dá)及其抗體的檢測(cè). 國(guó)際內(nèi)分泌代謝雜志 Intern J Endocrinol Metab, 2006, 26(3): 178-180
[2] Tetsuo Kondo, Shereen Ezzat and Sylvia L. Asa. Pathogenetic mechanisms in thyroid follicular-cell neoplasia. NATURE REVIEWS CANCER. 2006, 6: 292-306。