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IdeS protease
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QIP-001-A
5000U
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QIP-001-B
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QIP-001-C
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產(chǎn)品概述

背景:

      IdeS是僅在鉸鏈區(qū)下方的一個特定位點裂解IgG以產(chǎn)生F(ab')2和Fc片段的免疫球蛋白降解酶。Rhinogen? IdeS protease是利用E.coli系統(tǒng)重組表達生產(chǎn),并經(jīng)過分子改造得到的重組IdeS蛋白。其含有His標簽,在酶切完成后很容易從酶切反應體系中分離去除。IdeS蛋白酶在生理條件下切割IgG,從而保持免疫反應性。在pH 6.0~8.0范圍的常用緩沖液中,IdeS蛋白酶可有效切割多種抗體。經(jīng)過改造后的IdeS蛋白酶具有更高的酶活和更廣的底物特異性,除可酶切人IgG1~4、猴、羊、兔IgG外,還對小鼠IgG2a、IgG3具有特異性切割活性。

包裝規(guī)格:

     Rhinogen? IdeS protease包裝規(guī)格如下:

目錄號
規(guī)格
QIP-001-A
5000U
QIP-001-B
5×5000U
QIP-001-C
1000U

     QIP-001是凍干粉制劑產(chǎn)品,制劑緩沖液為20mM Tris,50mM NaCl,1mM EDTA,pH 7.5。

產(chǎn)品來源:

     RhinogenIdeS protease是利用E. coli表達系統(tǒng)重組表達生產(chǎn)并經(jīng)過分子改造得到的重組IdeS蛋白酶,分子量大小約為36kDa。

產(chǎn)品質(zhì)量:

     SDS-PAGE分析,純度≥95%。

產(chǎn)品特性:

     最適pH為6.0~8.0。

酶活定義:

     1個酶活力單位定義:37°C條件下,30分鐘內(nèi)酶切1μg重組單克隆IgG所需要的酶量。

儲存條件:

     1. 采用冰袋或干冰運輸, 收到產(chǎn)品后請立即將其置于-30℃至 -10℃凍存;

     2. 使用前,用無菌水溶解IdeS protease凍干粉末。溶解后,2~8℃存放,若無菌取用,有效期為30天。

產(chǎn)品特點:

     RhinogenIdeS protease是一種高度純化和非常穩(wěn)定的重組蛋白酶,具有穩(wěn)定性高、比活性高等特點。適用于重組抗體藥物的結(jié)構表征分析。

     1. 高比活性有效切割抗體下鉸鏈,獲得F(ab’)2和Fc片段;

     2. 廣泛的底物特異性:除對人IgG1~4、猴、羊、兔IgG有酶切活力外,還對小鼠IgG2a、IgG3具有特異性切割活性;

     3. 無動物源性:重組生產(chǎn),無外源性的病毒污染,生產(chǎn)過程不使用任何動物源原料;

     4. 高穩(wěn)定性:每批產(chǎn)品都經(jīng)過嚴格的質(zhì)量控制,以實現(xiàn)產(chǎn)品批間穩(wěn)定性。

應用:

     特定位點裂解IgG以產(chǎn)生F(ab’)2和Fc片段。

使用建議:

     1、試劑準備:
               1) 使用前,請將Rhinogen? IdeS protease取出,10000rpm離心10秒,確保所有干粉都在管底;
               2)用去離子水將RhinogenIdeS protease干粉溶解成50units/μl溶液。

     2、推薦使用方法:

     1)在消化緩沖液或其他相容緩沖液中加入所需量的IgG(0.5~10mg/ml);

     2)將Rhinogen? IdeS protease加入至IgG樣品中;

     注意:每1μg IgG加1 unit IdeS蛋白酶進行消化;例如,加入1μl(50 units)IdeS溶液以消化50μg的IgG;

     3)在37℃條件下孵育30~60分鐘。

操作說明:

     Rhinogen? IdeS protease能有效地切割人類,人源化,嵌合,羊,兔和猴IgG,并對小鼠IgG2a和IgG3具有較高活性。Rhinogen? IdeS protease也能切割許多Fc-融合蛋白以及抗體藥物偶聯(lián)物(antibody drug conjugates ,ADCs);

     1. IdeS protease不能切割小鼠IgG1 / IgG2b,大鼠,豬,?;蛏窖騃gG。此外,它不能切割非IgG同種型,包括IgA,IgM,IgD和IgE;
     2. 理想的IgG濃度應在0.5~10mg/ml的范圍內(nèi);
     3. 酶切反應緩沖液pH為6.0~8.0,最適pH6.5,且NaCl濃度不宜過高,建議消化緩沖液為10mM sodium phosphate,10mM NaCl,pH6.5;
     4. 對于小鼠IgG2a和小鼠IgG3的切割,增加IdeS蛋白酶的量(建議5倍至10倍作為起點)和孵育時間(2小時至過夜);
     5. 通過SDS-PAGE很容易確定IgG的切割;
     6. IdeS protease具有組氨酸標簽,便于從酶切反應體系中去除;
     7. 將消化產(chǎn)物與Protein A珠孵育30~60分鐘后,可以獲得純化的F(ab’)2片段;
     8. 本產(chǎn)品僅供研究使用,不適用于人或動物的診斷及治療用途。

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