單克隆抗體藥物的體外生物學(xué)活性檢測(cè)是對(duì)抗體類藥物有效成分以及效價(jià)進(jìn)行測(cè)定，是單抗藥物質(zhì)量控制中非常重要的一環(huán)，生物學(xué)活性檢測(cè)貫穿蛋白藥物整個(gè)生命周期，從早期靶點(diǎn)的發(fā)現(xiàn)，抗體的篩選，再過渡至CMC階段進(jìn)行生產(chǎn)、臨床應(yīng)用，到最后上市，都會(huì)涉及生物活性的分析。因此，選擇高效、快速、準(zhǔn)確的生物活性測(cè)定方法是極其重要的。
?下面我們以抗體藥物為例，說明生物學(xué)活性方法主要包括哪些。
1）細(xì)胞增殖抑制法
MTT法
CCK-8法
刃天青法
ATP法
ATP發(fā)光法是利用螢火蟲熒光素/熒光素酶與細(xì)胞內(nèi)的ATP發(fā)生氧化反應(yīng)而產(chǎn)生光子，通過檢測(cè)光度來得到ATP含量，從而分析細(xì)胞活性與增殖情況。具有靈敏度高、操作便捷等優(yōu)點(diǎn)。
報(bào)告基因法是通過重組抗體與相應(yīng)靶點(diǎn)結(jié)合后，測(cè)定信號(hào)通路變化效應(yīng)的活性評(píng)價(jià)方式。一般在細(xì)胞株難于獲得，以及殺傷中和或增殖抑制法產(chǎn)生量效曲線的信噪比不理想時(shí)，可基于對(duì)該通路的現(xiàn)有了解，將攜帶抗體作用靶點(diǎn)反應(yīng)元件與報(bào)告基因的質(zhì)粒穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細(xì)胞后，通過重組抗體與相應(yīng)靶點(diǎn)的作用，啟動(dòng)報(bào)告基因的表達(dá)來檢測(cè)重組抗體的生物學(xué)活性。
單抗類藥物的ADCC活性檢測(cè)的傳統(tǒng)方法是外周血單核細(xì)胞（PBMC）或自然殺傷細(xì)胞（NK）對(duì)靶細(xì)胞的殺傷實(shí)驗(yàn)，這種方法細(xì)胞分離難度大、實(shí)驗(yàn)操作復(fù)雜并且變異性大。近年來國(guó)內(nèi)外建立了基于報(bào)告基因法的ADCC活性檢測(cè)方法，完善了此類藥物的活性檢測(cè)方法。
除了檢測(cè)抗體對(duì)細(xì)胞的增殖和毒性作用外，還可以通過ELISA法測(cè)定靶細(xì)胞與抗體及刺激因子共培養(yǎng)后分泌的細(xì)胞因子來評(píng)價(jià)抗體的生物學(xué)活性。例如抗IL-17單抗可以根據(jù)其抑制IL-17誘導(dǎo)靶細(xì)胞釋放IL-6或GROα等細(xì)胞因子的能力來評(píng)價(jià)其生物學(xué)活性。將IL-17和IL-17單抗以及靶細(xì)胞接種到96孔板上，培養(yǎng)過夜。再通過ELISA法定量測(cè)定細(xì)胞上清液中分泌的細(xì)胞因子的含量，細(xì)胞因子的含量與抗體活性成反比。
基于SPR的BIA法測(cè)定周期短；樣品消耗量低，一般僅有微克級(jí)；另外，無需預(yù)先標(biāo)記熒光、二抗的分子，避免了標(biāo)記基團(tuán)對(duì)分子構(gòu)象的影響，從而反映出分子間真實(shí)的結(jié)合性質(zhì)；該技術(shù)除了獲取一般的親和力信息外，還能夠給出對(duì)闡述分子間結(jié)合機(jī)理更為寶貴的動(dòng)力學(xué)信息。SPR 技術(shù)已廣泛應(yīng)用于小分子制藥和生物制藥領(lǐng)域，在抗體分析領(lǐng)域，其應(yīng)用主要包括：
隨著技術(shù)的進(jìn)步，藥物體外生物學(xué)活性檢測(cè)手段越來越多，比如均相時(shí)間分辨熒光、Alpha技術(shù)、熒光染料標(biāo)記法等。一種藥物往往可通過多種方法進(jìn)行體外活性的測(cè)定，例如：以VEGF或VEGFR2為靶點(diǎn)的單抗類藥物的生物活性測(cè)定方法包括增殖抑制法和報(bào)告基因法。一種被廣泛應(yīng)用的方法是人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞（Human umbilical vein endothelial cell,）增殖抑制法，但是這種方法變異性大，重復(fù)性差。一種基于VEGF的主要作用機(jī)理VEGF-VEGFR-NFAT途徑的報(bào)告基因法，該方法通過檢測(cè)熒光素酶化學(xué)發(fā)光信號(hào)對(duì)其生物學(xué)活性進(jìn)行檢測(cè)，可以作為HUVEC增殖抑制法的可行補(bǔ)充方法，并用于其它種類的抗VEGF抗體的效力測(cè)定。
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參考文獻(xiàn)