背景:

       抗體依賴的細(xì)胞介導(dǎo)的細(xì)胞毒性作用（Antibody-dependent cell-mediated cytotoxicity, ADCC）是免疫系統(tǒng)對抗病毒感染及腫瘤疾病的一種重要免疫防御機(jī)制?？贵w通過與靶細(xì)胞表面抗原特異性結(jié)合，招募如自然殺傷（Natural killer, NK）細(xì)胞等效應(yīng)細(xì)胞殺死靶細(xì)胞。NK細(xì)胞表面表達(dá)FcγRIIIa蛋白，是一種抗體Fc區(qū)域的受體，能識別并結(jié)合抗體的Fc端，從而使NK細(xì)胞結(jié)合到靶細(xì)胞周圍。一旦Fc受體與抗體的Fc區(qū)域結(jié)合，NK細(xì)胞就會釋放細(xì)胞因子和細(xì)胞毒性顆粒，進(jìn)入靶細(xì)胞觸發(fā)細(xì)胞凋亡。傳統(tǒng)的ADCC檢測方法是利用外周血單核細(xì)胞（Peripheral blood mononuclear cells, PBMCs）或者從其中分離得到NK細(xì)胞作為效應(yīng)細(xì)胞進(jìn)行檢測，該方法的效應(yīng)細(xì)胞較難獲取，且方法變異性大、操作繁瑣。

       Rhinogen^? ADCC Reporter Bioassay, Complete Kit (WIL2-S)報(bào)告基因檢測系統(tǒng)包含抗CD20抗體ADCC功能檢測所需的靶細(xì)胞WIL2-S細(xì)胞及抗CD20抗體對照品。如果您的待測抗體能識別WIL2-S細(xì)胞上的不同表面抗原，該試劑盒仍舊適用于您抗體的ADCC活性檢測。

       本系統(tǒng)采用基因工程改造的Jurkat細(xì)胞作為效應(yīng)細(xì)胞，該細(xì)胞穩(wěn)定表達(dá)FcγRIIIa受體（V158高親和力突變體）和由NFAT應(yīng)答元件驅(qū)動表達(dá)的螢火蟲螢光素酶。抗體通過與效應(yīng)細(xì)胞表面FcγRIIIa的結(jié)合，激發(fā)細(xì)胞內(nèi)NFAT反應(yīng)元件，NFAT反應(yīng)元件則驅(qū)動螢火蟲熒光素酶的表達(dá)。熒光素酶活性通過生物發(fā)光進(jìn)行定量。

       Rhinogen^? ADCC Reporter Bioassay是一種生物發(fā)光報(bào)告基因檢測方法，用于檢測抗體的ADCC生物學(xué)活性。其作用機(jī)理基于NFAT（Nuclear factor of activated T-cells）反應(yīng)通路（圖1）。本系統(tǒng)采用基因工程改造的Jurkat細(xì)胞作為效應(yīng)細(xì)胞，該細(xì)胞穩(wěn)定表達(dá)FcγRIIIa受體（V158高親和力突變體）和由NFAT應(yīng)答元件驅(qū)動表達(dá)的螢火蟲螢光素酶?？贵w通過與效應(yīng)細(xì)胞表面FcγRIIIa的結(jié)合，激發(fā)細(xì)胞內(nèi)NFAT反應(yīng)元件，NFAT反應(yīng)元件則驅(qū)動螢火蟲熒光素酶的表達(dá)。熒光素酶活性通過生物發(fā)光進(jìn)行定量。

圖1.Rhinogen^? ADCC Reporter Bioassay原理圖

產(chǎn)品規(guī)格:

名稱	規(guī)格	貨號
Rhinogen? ADCC Reporter Bioassay, Complete Kit (WIL2-S)	1kit	RA-CK03
試劑盒組分：
?        ADCC Bioassay效應(yīng)細(xì)胞（5 × 106cells/ml）,1 × 1ml
?       WIL2-S靶細(xì)胞（2 × 106cells/ml）,1 × 1ml ?       抗CD20抗體對照品,1 × 10μg

特點(diǎn):

       Rhinogen^? ADCC報(bào)告基因檢測系統(tǒng)提供的ADCC生物學(xué)活性檢測方法操作具有操作簡便（圖2）、變異性低、靈敏度高等特點(diǎn)。

       1. 原理明確：基于抗體結(jié)合細(xì)胞對效應(yīng)細(xì)胞FcγRIIIa受體信號通路的激活

       2. 應(yīng)用廣泛：治療性抗體藥物的Fc功能學(xué)研究和產(chǎn)品質(zhì)控、ADCC作用機(jī)制研究

       3. 操作簡便：檢測過程簡單，檢測試劑易用

       4. 適用性廣：該系統(tǒng)已完成針對懸浮或貼壁的多種靶細(xì)胞的適用性驗(yàn)證，效果良好

       5. 靈敏度高：可靈敏的檢測到抗體糖型的改變

       6. 穩(wěn)定性好：傳代30次仍可穩(wěn)定靈敏檢測，數(shù)據(jù)重復(fù)性好

       Rhinogen^? ADCC報(bào)告基因檢測系統(tǒng)的各項(xiàng)特性使得其可作為抗體篩選、抗體糖基化修飾等研究的有效手段。同時(shí)，該法可作為抗體藥物ADCC活性的常規(guī)檢測方法及批簽發(fā)檢測指標(biāo)。

圖2.Rhinogen^? ADCC Reporter Bioassay檢測流程圖

運(yùn)輸及儲存:

       運(yùn)輸方式：干冰運(yùn)輸。

       儲      存：收到細(xì)胞后，請立即將ADCC Bioassay 效應(yīng)細(xì)胞及Raji靶細(xì)胞凍存管轉(zhuǎn)移至-140°C以下的保存條件長期保存?？?span microsoft="" yahei";"="" font-size:14px;line-height:1.5;letter-spacing:-0.05pt;"="">CD20抗體請保存在-20℃。